DMEM完全培养基

★产品货号

BW120013

★产品内容

★ 使用注意事项

1.在配制完全培养基前，请把胎牛血清（FBS）、青霉素-链霉素(P/S)放到2-8℃冰箱过夜解冻。

2.在使用完全培养基前，需要把培养基放到37℃恒温水浴中预热，注意温度不要超过37℃。

3.请把配制好的完全培养基放在4℃冰箱避光保存，并尽量在一个月内使用完。避免反复冻融，若培养基要分几次使用，请将胎牛血清（FBS）、青霉素-链霉素(P/S)解冻按用量分装后保存。

★ 产品用于

仅供研究使用。不适用于人或动物体外诊断与治疗。

★ 培养条件

37℃，5% CO2，无菌恒温培养。

★ 相关操作

细胞复苏

1.把完全培养基放入37°C水浴中预热；
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续孵育细胞）；
3.在超净台中加入5ml的完全培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4.弃上清,加入5ml的完全培养基重悬细胞，转移到T-25细胞培养瓶中（带滤芯）；
5.将培养瓶置于37℃，5% CO2的无菌培养箱中培养；

6.第二天，用新鲜的完全培养基给细胞换液。

细胞传代培养

1.在显微镜下观察细胞，当细胞融合度超过80%时，即可传代培养；

2.37℃水浴预热培养基；

3.在超净台中，弃掉T-25细胞培养瓶中的培养基，加入2ml PBS清洗，再加入1ml 0.25%胰酶-EDTA消化细胞；

4.在显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，即可加入5ml完全培养基终止消化；

5.用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；

6.将细胞转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

7.弃上清,加入15-20ml的完全培养基重悬细胞后转入T-75细胞培养瓶中或按适当比例接种到T-25细胞培养瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶），混匀细胞悬液，确保细胞均匀分布；

8.将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养；

9.每两天用新鲜、预热的完全培养基进行换液。

细胞冻存

细胞冻存可用百恩维的“无DMSO无血清细胞冻存液”，具体操作如下。

1. 细胞消化和计数，用胰酶对待冻存的细胞进行消化，并对细胞进行计数；

2. 1000rpm离心5分钟，去掉上清；

3. 根据细胞计数的情况，加入适量的冻存液，使细胞密度在1×106/ml左右（或根据自己希望达到的细胞密度）；

4. 轻轻地重悬细胞（务必重悬均匀），将重悬的细胞按等份加入到灭菌的冻存管（需提前做好标记或者贴上标签）中，旋紧冻存管盖；

5. 将冻存管放入程序降温冻存盒中，然后将冻存盒直接放入-80℃；

6. 第二天将细胞从-80℃转移到液氮中。

注：如客户用自己配制的冻存液冻存细胞，请避免用甘油作为保护剂。